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Resumen: El virus de pseudorabia (PRV), es un virus ADN doble cadena perteneciente a la familia Herpesviridae, subfamilia Alfaherpesvirinae, género Varicellovirus. Es un virus neurotrópico que puede establecer infecciones latentes en células del tejido nervioso, pero ocasiona encefalitis en animales jóvenes y en varios otros huéspedes. Algunas de las vacunas utilizadas a nivel global se basan en la cepa Bartha-K61, la cual es deficiente en las regiones que codifican para la glicoproteína E (gE), US9 y parcialmente glicoproteína I y US2, presentando adicionalmente mutaciones en las secuencias codificantes para gC, gM y UL21. Particularmente, la deleción de gE en las vacunas basadas en esta cepa viral, permitió el uso de sistemas de serología que diferencien animales infectados de los vacunados al carecer los animales vacunados de respuesta de anticuerpos contra dicha glicoproteína. En la estrategia planteada en el presente proyecto, se realizará la modificación racional del genoma viral de la cepa Shope de PRV, que presenta la ventaja de tener la información del genoma completo en esa región pudiendo realizar la edición del genoma para eliminar de manera completa la región de gE, en combinación con la deleción de la región codificante para gI, o el gen de la Timidina quinasa viral (TK), pudiendo tener más posibilidades de generar una cepa para el desarrollo de vacunas marcadoras. Una vez realizados los bancos celulares de las células MDBK y PK-15, se utilizarán como sustrato para la generación del virus modificado genéticamente en diferentes puntos del genoma, como se mencionó anteriormente. Para realizar estas modificaciones se emplearán dos estrategias principalmente, a) por medio del uso del sistema de edición genómica CRISPR/Cas9 (del inglés Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9), y b) por medio de recombinación homóloga tradicional. Para la primera estrategia, se han diseñado los plásmidos de transferencia y las moléculas que generarán los ARNs que servirán de guías para realizar la edición génica y permitirán obtener los virus modificados. En ambas estrategias se plantea el uso de genes reporteros para facilitar la búsqueda de los clones recombinantes, tales como la proteína verde fluorescente (eGFP) o la enzima luciferasa. Con las mencionadas estrategias, se espera arribar en el tiempo estipulado de proyecto a la obtención del virus recombinante adecuado y poder caracterizarlo molecularmente para la generación del banco viral.